PCR儀就是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。目前常用的技術(shù),可以將一段基因復(fù)制為原來(lái)的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn),可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類。
工作原理:
利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。
PCR儀分類:
1、普通的PCR儀
把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,叫傳統(tǒng)的PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是做簡(jiǎn)單的,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。該儀器主要應(yīng)用于科研研究,教學(xué),醫(yī)學(xué)臨床,檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)。
2、梯度PCR儀
把一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。
3、原位PCR儀
用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀,如病源基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等。
4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。